滑膜炎颗粒为夏枯草、土茯苓:功劳叶、薏苡仁、防己、丝瓜络、泽兰、黄芪、丹参、当归等13味药经加工制成的胶囊,具有清热利湿,活血通络的功效。临床用于急、慢性滑膜炎及膝关节术后的患者。该标准用HPLC法测定处方中丹参的原儿茶醛含量。本方采用HPLC法对滑膜炎颗粒(公司自制,规格0.35 g)中防已的主要成份粉防已碱进行测定,经方法考察,结果令人满意。
方法与结果:色谱条件及系统适应性试验
色谱柱:Zorbax SB Cl8柱(250 mm×4.6 mm,5 m),流动相:甲醇-0.3%二乙胺溶液(85:15);流速:1.0 ml•min~。柱温:30℃ 。检测波长为280 nm。取对照品溶液10 l,注入高效液相色谱仪,按上述条件测定,粉防己碱出峰时间约为10.0 min,粉防己碱峰理论塔板数为4 600,与其相临色谱峰的分离度大于2.0。
对照品溶液的制备 精密称取粉防己碱对照品适量,加甲醇溶解制成每1 ml含粉防己碱0.12 mg的对照品溶液(A)。精密量取此对照品溶液2 ml,置10 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液B。
供试品溶液的制备取本品约1.4 g,精密称定,置100 ml具塞三角瓶中,加入流动相25 ml,超声处理(540 W,38.5 kHz)30 min,放冷,称定重量,用流动相补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。按处方比例取不含粉防已的阴性样品 同法制成阴性对照溶液。
干扰实验:取不含粉防己阴性对照溶液及供试品溶液进样,结果表明,阴性供试品在粉防己碱位置处无色谱峰。
样品分别采用流动相溶液和2%盐酸甲醇溶液超声处理后,取续滤液1O l,注入液相色谱仪,记录色谱图,从色谱图中可以看出,以流动相处理的样品色谱峰分离效果明显优于用盐酸甲醇溶液。
供试品溶液的制备一般常用超声法或回流法,尤以超声法最为简便。本试验研究考察了样品加入流动相溶液分别超声处理(540 W,38.5 KHz)15,3O,45 min,取续滤液1Ol,注入液相色谱仪,记录色谱图,按峰面积用外标法计算含量。测定结果表明供试品溶液制备时超声处理30 min即可。